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網(wǎng)站首頁(yè)  ◇  技術(shù)支持  ◇  紫外分析儀檢測(cè)乳和乳粉中黃曲霉毒素M1
紫外分析儀檢測(cè)乳和乳粉中黃曲霉毒素M1
  • 發(fā)布日期:2016-04-20     信息來(lái)源:      瀏覽次數(shù):3346
    • ICS 67.100.10
      X 04
      GB/T 18980-2003
      乳和乳粉中黃曲霉毒素M,的測(cè)定
      免疫親和層析凈化液相色譜法
      和 熒 光 光 度 法
      Determination of aflatoxin M1 content in milk and milk powder-
      Cleanup by immunoaffinity chromatogaphy and determination by
      hig h- pe rformancel iquidc hromatigraphya ndf luorometer
      (ISO 14501:1998,IDT)
      2003-02-21發(fā)布2003-08-01實(shí)施
      中華人民共和國(guó)
      國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布
      GB/T 18980-2003
      前言
      本標(biāo) 準(zhǔn) 的 免疫親和層析凈化一液相色譜法等同采用ISO1 4501;1998《乳和乳粉中黃曲霉毒素
      M 免疫親和層析凈化液相色譜法》。
      本標(biāo) 準(zhǔn) 免 疫親和層析凈化一熒光光度法快速測(cè)定乳和乳粉中黃曲霉毒素M,o
      本標(biāo) 準(zhǔn) 中 的附錄A為資料性附錄
      本標(biāo) 準(zhǔn) 由 北京市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局提出。
      本標(biāo) 準(zhǔn) 由 全國(guó)食品工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。
      本標(biāo) 準(zhǔn) 起 草單位:北京市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所、青島出人境檢驗(yàn)檢疫局、國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心。
      本標(biāo) 準(zhǔn) 主 要起草人:王晶、張鵬、張藝兵、邵明武。
      本標(biāo) 準(zhǔn) 為 發(fā)布。
      GB/T 18980-2003
      乳和乳粉中黃曲霉毒素M,的測(cè)定
      免疫親和層析凈化液相色譜法
      和熒 光 光 度 法
      免疫親和層析凈化液相色譜法
      1. 1 范圍
      本標(biāo) 準(zhǔn) 適 用于乳、乳粉,以及低脂乳、脫脂乳、低脂乳粉和脫脂乳粉中黃曲霉毒素M,含量的測(cè)定。
      乳粉中的zui低檢測(cè)限是。.08 pg/kg,乳中的zui低檢測(cè)限是。.008 pg/l
      1.2 術(shù)語(yǔ)和定義
      下列 術(shù) 語(yǔ) 和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。
      1.2. 1
      黃曲 碑 毒 索M,含, at7atoxinM ,co ntent
      通過(guò) 本 標(biāo) 準(zhǔn)所測(cè)定出的本物質(zhì)的質(zhì)量含量。
      注 :黃 曲 霉毒素M、的含量以微克/升伽g/L)或微克/千克(fig/kg)表示。
      1. 3 原理
      試樣 通 過(guò) 免疫親和柱時(shí),黃曲霉毒素M 被提取。親和柱內(nèi)含有的黃曲霉毒素M、特異性單克隆
      抗體交聯(lián)在固體支持物上,當(dāng)樣品通過(guò)親和柱時(shí),抗體選擇性的與黃曲霉毒素M,(抗原)鍵合,形成抗
      體一抗原復(fù)合體。用水洗柱除去柱內(nèi)雜質(zhì),然后用洗脫劑洗脫吸附在柱上的黃曲霉毒素M,,收集洗脫
      液。用帶有熒光檢測(cè)器的液相色譜儀測(cè)定洗脫液中黃曲霉毒素M,含量
      1.4 試荊
      除非 特 別 聲明,所用試劑為分析純;使用蒸餾水、去離子水或其他相當(dāng)純度的水。
      1.4.1 免疫親和柱:應(yīng)該含有黃曲霉毒素M 的抗體。親和柱的zui大容量不小于100 ng黃曲霉毒素
      M,(相當(dāng)于50 ml濃度為2 pg/l的試樣),當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)溶液含有4 ng黃曲霉毒素M,(相當(dāng)于50 mL濃度為
      80 ng/l的試樣)時(shí)回收率不低于80 。應(yīng)該定期檢查親和柱的柱效和回收率,對(duì)于每個(gè)批次的親和柱
      至少檢查一次(見(jiàn)1.4.1.1和1.4.1.2)
      1.4.1.1 柱效檢查
      用移 液 管 (1.5.4)移取1.0m 工_的黃曲霉毒素M,儲(chǔ)備液(1.4.5.2)到20m L的錐形試管中
      (1.5.9)。用恒流的氮?dú)?1.4.3)將液體慢慢吹干,然后用10 ml. 10%的乙睛(1.4. 2.2)溶解殘?jiān)昧?/span>
      搖蕩。
      將該 溶 液 加人到40m L的水中,充分混勻,全部通過(guò)免疫親和柱。按說(shuō)明書要求使用免疫親和柱。
      淋洗免疫親和柱后,洗脫下黃曲霉毒素M,。將洗脫液進(jìn)行適當(dāng)稀釋后,用液相色譜儀測(cè)定免疫親
      和柱鍵合的黃曲霉毒素M,含量。
      計(jì)算 黃 曲 霉毒素M,的回收率,將其結(jié)果與1.4.1中所要求的指標(biāo)進(jìn)行比較。
      1.4.1.2 回收率檢查
      用移 液 管 (1.5們移取。.8 m l。005p g/ml的黃曲霉毒素Ml標(biāo)準(zhǔn)工作液(1.4.5.3)到10m L的
      水中,充分混勻,全部通過(guò)免疫親和柱。按說(shuō)明書使用免疫親和柱。淋洗免疫親和柱,洗脫下黃曲霉毒
      素M:。將洗脫液進(jìn)行適當(dāng)稀釋后,用液相色譜儀測(cè)定免疫親和柱鍵合的黃曲霉毒素M,含量。計(jì)
      GB/T 18980-2003
      算黃曲霉毒素M,的回收率,將其結(jié)果與1.4. 1中所要求的指標(biāo)進(jìn)行對(duì)比。
      1.4.2 乙睛:色譜級(jí)
      1.4.2.1 25%乙睛一水溶液:將250m L的乙睛(1.4.2)與750m l的水混溶(使用前需要脫氣)。
      1.4.2.2 10%乙睛一水溶液:將100m L的乙睛(1.4.2)與900m L的水混溶(使用前需要脫氣)。
      1.4.3 氮?dú)狻?/span>
      1.4.4 三抓甲烷:加人。.5%^-1.0%質(zhì)量比(與三抓甲烷質(zhì)量比)的乙醇進(jìn)行穩(wěn)定。
      1.4.5 黃曲霉毒素M:標(biāo)準(zhǔn)溶液
      1.4.5. 1 校準(zhǔn)溶液
      黃曲 霉 毒 素M:三抓甲烷溶液標(biāo)稱濃度為10p g/mL。根據(jù)下面的方法,在zui大吸收波段處測(cè)定溶
      液的吸光度,以確定黃曲霉毒素M,的實(shí)際濃度。
      用分 光 光 度計(jì)(1.5.11)在340n m^-370n m處測(cè)定,扣除三抓甲烷的空白本底,讀取標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸
      光度值。在接近360 nmzui大吸收波段A、二處,測(cè)得吸光度值為A,根據(jù)式(1)計(jì)算出濃度值
      c, (Pg/mL),
      ..
      ‘ = A X M X 1 00 /e · ··· ··· ·· ·· ··· ··· ··· ··· ··· ··· · ··· ·? ? ( 1 )
      式 中 :
      A— 在 3m.:處測(cè)得的吸光度值;
      M- - 32 8g /mol,黃曲霉毒素M,摩爾質(zhì)量,單位為克每摩爾(g/mol);
      E- 19 95,溶于三抓甲烷中的黃曲霉毒素M,的吸光系數(shù),單位為平方米每摩爾(m'/m ol),
      1.4.5.2 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液
      確定 黃 曲 霉毒素M;標(biāo)準(zhǔn)溶液的實(shí)際濃度值后(1.4.5.)1,繼續(xù)用三抓甲烷將其稀釋至濃度為
      0.1 u g/mI一的儲(chǔ)備液。儲(chǔ)備液密封后于冰箱中5℃以下避光保存。在此條件下,儲(chǔ)備液可以穩(wěn)定兩個(gè)
      月。兩個(gè)月后,應(yīng)該對(duì)儲(chǔ)備液的穩(wěn)定性進(jìn)行核查。
      1.4.5.3 黃曲霉毒素M,標(biāo)準(zhǔn)工作液
      從冰 箱 中 取出儲(chǔ)備液(1.4.5.2)放置至室溫,移取一定量的儲(chǔ)備液進(jìn)行稀釋制備成工作液。工作液
      當(dāng)天使用當(dāng)天制備。
      黃曲 霉 毒 素M,標(biāo)準(zhǔn)工作液配制:用移液管(1.5. 4) 準(zhǔn)確移取1.0 m L的儲(chǔ)備液(1.4. 5. 2)到20m L
      的錐形試管中(1.5.9),用和緩的氮?dú)?1.4.3)將溶液吹干,然后用20.0 m L1 0%的乙睛(1.4.2.2)將殘
      渣重新溶解,30m in內(nèi)振搖、混勻,配成濃度為。.00 5j g/mI的黃曲霉毒素M;標(biāo)準(zhǔn)工作液。在用氮?dú)?/span>
      對(duì)儲(chǔ)備液吹干的過(guò)程中,一定要仔細(xì)操作,不能讓溫度降低太多而出現(xiàn)結(jié)露。
      在作 標(biāo) 準(zhǔn) 曲線時(shí),黃曲霉毒素M,的進(jìn)樣量分別為。.05n g,0.1 n g,0.2 n g和。.4 n g。根據(jù)液
      相色譜儀進(jìn)樣環(huán)的容積量,用工作液配制一系列適當(dāng)濃度的黃曲霉毒素M,標(biāo)準(zhǔn)溶液,稀釋液用10%乙
      睛(1.4.2.2)
      5 儀骼及材料
      便用 實(shí)驗(yàn)室通用儀器設(shè)備,特殊儀器及材料說(shuō)明如下
      1,5. 1
      1.5.2
      1.5.3
      1.5.4
      1.5.5
      1.5.6
      1.5.7
      1.5.8
      1.5.9
      1.5. 10
      一次性注射器:10 mL和50 mL,
      真空系統(tǒng)。
      離心機(jī):40 00g 離心力(離心力g=1.12 X 1 0-,X 轉(zhuǎn)/分X旋轉(zhuǎn)半徑)。
      移液管:1.0m L,2.0 m l和50.0 M L,
      玻璃燒杯:250 mLo
      容量瓶:100 mLe
      水浴
      濾紙
      :溫控30℃士2',50℃士20C,溫度范圍350C---370C,
      帶刻度的磨口錐形玻璃試管:5 mL,10 mL,20 mI。
      液相色譜儀
      GB/T 18980-2003
      1.5. 10.1 無(wú)脈沖泵:適合恒定體積流量約1 mL/min的泵
      1.5. 10.2 進(jìn)樣系統(tǒng):具有固定或可變?nèi)莘e的進(jìn)樣環(huán),進(jìn)樣體積50川--500 pL.
      1.5. 10.3 反相色譜柱:填充3 um或者5 km的十八烷基硅膠,加有填充反相材料的保護(hù)柱。
      1.5. 10 .4 熒光檢測(cè)器:具有365n m激發(fā)波長(zhǎng)、435n m發(fā)射波長(zhǎng),在適當(dāng)?shù)纳V條件下能夠測(cè)定
      0. 02 ng的黃曲霉毒素M,(相當(dāng)于5倍噪音)。
      1.5. 10.5 記錄儀:帶打印機(jī)或繪圖儀、電子積分儀或計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。
      1.5. 1 1 分光光度計(jì):波長(zhǎng)范圍為200n m--400n m,帶光徑長(zhǎng)度為1c m的石英比色池。
      1.5. 12 天平:準(zhǔn)確至。.1g,zui小分度。.01 go
      1.6 采樣
      采樣 方 法 不屬于本標(biāo)準(zhǔn)敘述的范圍,推薦的采樣方法請(qǐng)參見(jiàn)ISO7 07[1]a
      實(shí)驗(yàn) 室 收 到的樣品應(yīng)該具有真正的代表性,在運(yùn)輸和儲(chǔ)藏的過(guò)程中沒(méi)有被損壞和改變。
      1.7 分析步驟
      1.7. 1 概述
      所有 的操 作分析均應(yīng)盡可能在避光條件下進(jìn)行。
      使用 不 同 廠商的親和柱,在乳粉的制作、洗滌和洗脫的操作方面可能略有不同,應(yīng)該嚴(yán)格按照說(shuō)明
      書要求進(jìn)行操作。通常的分析步驟包括:用水或者鹽水緩沖液將乳粉沖制成乳,離心分離后在一定壓力
      過(guò)柱(可能需要預(yù)洗),用水洗柱,并用甲醇或乙睛洗脫吸附在柱上黃曲霉毒素M,。嚴(yán)格按照規(guī)定的流
      速進(jìn)行操作。
      1.7.2 制備試樣
      1.7.2. 1 乳
      將乳 樣 品 在水浴(1.5 .7) 中加熱到350C-370C。用濾紙(1.5.8)過(guò)濾(根據(jù)情況,也許需要用幾張
      濾紙進(jìn)行過(guò)濾),或者在4 000 g離心力下離心15 min。至少收集50 mL乳試樣,按照1.7.4繼續(xù)進(jìn)行
      分析。
      1.7.2.2 乳粉
      稱取 10 g樣品(到0.1 g ),置于250m L的燒杯(1.5.5)中。將50m L已預(yù)熱到50℃的水多次
      少量地加人到乳粉中,用攪拌棒將其混合均勻。
      如果 乳 粉 不能*溶解,將燒杯在50℃的水浴(1.5. 7)中放置至少30m in,仔細(xì)混勻。
      將溶 解 的 乳粉冷卻至20℃后,移人100m l容量瓶(1.5.6 ) 中,用少量的水分次淋洗燒杯,淋洗液一
      并移人容量瓶中,再用水定容至刻度。用濾紙(1.5.8)過(guò)濾乳,或者在4 000 g離心力下離心15 min,
      至少收集50 ml_的乳試樣,按照1.7.4繼續(xù)進(jìn)行分析。
      1.7.3 免疫親和柱的準(zhǔn)備
      將一 次 性 的50m L注射器筒(1.5.1)與親和柱(1.4.1)的頂部相連,再將親和柱與真空系統(tǒng)
      (1.5.2)連接起來(lái)。
      ,.7.4 樣品的提取與純化
      用移 液 管 移取50m L試樣(1.7.2.1或1.7.2.2)到50m L注射器(1.5.1)中,調(diào)節(jié)真空系統(tǒng)
      (1.5.2),控制試樣以Zm工一min-3 ML/min穩(wěn)定的流速過(guò)柱。
      取下 50 M I的注射器,裝上10m L注射器。注射器內(nèi)加人10M I水,以穩(wěn)定的流速洗柱,然后,抽
      干親和柱。
      脫 開(kāi)真 空 系統(tǒng),裝上另一個(gè)10m L注射器,加人4m L乙睛(1.4.2),緩緩?fù)苿?dòng)注射器栓塞,通過(guò)柱
      塞控制流速,洗脫黃曲霉毒素M,,洗脫液收集在錐形管(1.5.9)中,洗脫時(shí)間不少于60 s。然后用和緩
      的氮?dú)?1.4.3)在30℃下將洗脫液蒸發(fā)至體積V。為50 1,L-500 pL(警告:如果蒸發(fā)至干,會(huì)損失黃曲
      霉毒素M,)。用水將V。稀釋10倍至zui終體積為V,(即500 pL-5 000 VI)。
      注:如果注人液相色譜儀含黃曲霉毒素M 的樣品,乙睛含量超過(guò)10腸,色譜峰變寬。如果水含量超過(guò)90%
      則 對(duì) 色 譜峰的形狀沒(méi)有影響。
      cs/T 18980-2003
      1.7.5 液相色譜分析儀
      1. 7.5.1 泵
      以t ra定 流 速 將 乙睛一水溶液(1.4.2.1)泵流通過(guò)液相色潛柱。如果需要(根據(jù)所用色譜柱的型
      號(hào)),調(diào)整乙睛一水的比例,以保證使黃曲霉毒素M,與其他成分的分離效果*。
      乙睛 水 溶 液 (1.4.2.1)的體積流速根據(jù)所用色譜柱(1.5. 10 .3 ) 而定對(duì)于普通色譜柱(柱長(zhǎng)約
      25 cm,柱內(nèi)徑約4. 6 mm)而言,流速在1 ml-/min左右,效果;柱內(nèi)徑為3 mm時(shí),流速在
      。.5 mL·min左右,效果
      為 了確 定 *的色譜條件,先將不含黃曲霉毒素M,的陰性樣品提取液注人HPLC,然后再注
      人樣品提取液與黃曲霉毒素M 標(biāo)準(zhǔn)溶液的混合液
      1.7.5.2 色譜性能
      標(biāo)準(zhǔn) 曲 線 的線性度和色譜系統(tǒng)的穩(wěn)定性需要經(jīng)常檢查,多次反復(fù)地注人固定量的黃曲霉毒素M,
      標(biāo)準(zhǔn)溶液,直至獲得穩(wěn)定的峰面積和峰高。相鄰兩次峰面積和峰高的差異不得超過(guò)5%e
      黃曲 霉 毒 素M,的保留時(shí)間與溫度有關(guān),所以對(duì)測(cè)定系統(tǒng)的漂移需要補(bǔ)償。每隔一段時(shí)間測(cè)定固
      定量的黃曲霉毒素M,標(biāo)準(zhǔn)溶液,這些標(biāo)準(zhǔn)溶液的測(cè)定結(jié)果可以根據(jù)漂移的情況進(jìn)行校正。
      1.7.5.3 黃曲.毒索M:的標(biāo)準(zhǔn)曲線
      根據(jù) HP LC進(jìn)樣環(huán)容積,選擇適當(dāng)體積數(shù)V,,分別注人含有。.05n g,0.1 n g,0.2n g和0.4 n g的
      黃曲霉毒素M 標(biāo)準(zhǔn)溶液。繪制成峰面積或峰高對(duì)黃曲霉毒素M,質(zhì)量數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
      1.7.5.4 樣品洗脫液的色譜分析及進(jìn)樣方案
      通過(guò) 進(jìn) 樣 環(huán)將適量體積V.洗脫液注人液相色譜儀。采用與標(biāo)準(zhǔn)溶液相同的色譜條件分離出
      洗脫液中的黃曲霉毒素M,。標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品洗脫液均按照規(guī)定的方案進(jìn)樣。當(dāng)連續(xù)檢測(cè)一系列樣品
      時(shí),建議每隔五個(gè)樣品,加測(cè)一個(gè)黃曲霉毒素M,標(biāo)準(zhǔn)溶液。
      根 據(jù) 樣 品洗脫液色譜圖中黃曲霉毒素M,的峰高或峰面積值,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上得出樣品洗脫液中所
      含有的黃曲霉毒素M 質(zhì)量數(shù)(ng).
      如果 樣 品 洗脫液的黃曲霉毒素M,的峰面積或峰高值高于標(biāo)準(zhǔn)溶液,用水定容稀釋樣品洗脫液后,
      重新進(jìn)樣分析。
      1.8 測(cè)定結(jié)果的計(jì)算與表示
      1.8. 1 乳
      應(yīng)用 式 ( 2)計(jì)算被測(cè)樣品中的黃曲霉毒素M,的含量wme
      wm = M nX ( V, /V )X ( 1/ V) ··· ··· ··· ···· ··· ···· ··· ···· ? ? (2 )
      式 中 :
      w一 下 黃 曲霉毒素M的含量,單位為微克每升(Pg/1.);
      MA - 一 樣品洗脫液黃曲霉毒素M 的峰面積或峰高從標(biāo)準(zhǔn)曲線上得出的黃曲霉毒素M 的質(zhì)量
      數(shù), 單 位 為納 克 ( ng );
      V; 止 樣 品洗脫液的體積數(shù),單位為微升(f4L);
      V -一 樣 品洗脫液的zui終體積數(shù),單位為微升(川_);
      V- 一 通 過(guò) 免 疫親和柱被測(cè)樣品的體積數(shù),單位為毫升(ML)o
      計(jì) 算結(jié) 果 表示到小數(shù)點(diǎn)后三位。
      1.8.2 叨姍
      應(yīng)用式(3)計(jì)算被測(cè)樣品中的黃曲霉毒素M,的含量woo
      w。二m X(v/v.)X (1/m) ···························??(3)
      w=C'l-p- 樣品中的黃曲霉毒素M,的含量,單位為微克每千克((lg/kg);
      50 ml樣液(7.4)中所含有的乳粉質(zhì)量數(shù),單位為克(g);
      GB/T 18980-2003
      mn ,V,,vi的含義與1.8.1中所定義的一樣。
      式( 3)適用于未經(jīng)稀釋的試樣,否則應(yīng)該乘以稀釋倍數(shù)。
      計(jì) 算結(jié)果表示到小數(shù)點(diǎn)后三位。
      9 精密度
      各 實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)結(jié)果的精密度總結(jié)于附錄A中,這些數(shù)據(jù)不適用于其他的濃度范圍和材質(zhì)。
      10 測(cè)試報(bào)告
      測(cè) 試報(bào)告中應(yīng)該含有:
      a) 描述樣品完整特征所需要的所有信息;
      b) 采樣方法,如果知道請(qǐng)寫上;
      。) 根據(jù)該標(biāo)準(zhǔn),所采用的試驗(yàn)方法;
      d) 該標(biāo)準(zhǔn)沒(méi)有提出的其他操作細(xì)節(jié),對(duì)測(cè)試結(jié)果可能產(chǎn)生影響的操作、現(xiàn)象以及采取的措施
      e) 測(cè)試結(jié)果;
      f) 如果檢查了重復(fù)性,zui終的驗(yàn)證結(jié)果。
      2 免疫親和層析凈化熒光光度法

      21 范圍
      本方 法 規(guī) 定了用免疫親和層析凈化熒光光度法測(cè)定乳和乳粉中黃曲霉毒素M,的條件和詳細(xì)分析
      步 驟。
      本 方 法 適 用 于乳和乳粉中黃曲霉毒素M 的快速測(cè)定。乳中黃曲霉毒素M:的檢出限為
      0. 1 pg/L,乳粉中黃曲霉毒素M,的檢出限為。.l pg/kgo
      22 方法提要
      試樣 經(jīng) 過(guò) 離心、脫脂、過(guò)濾后,濾液經(jīng)過(guò)含有黃曲霉毒素M,特異性單克隆抗體的免疫親和層析凈
      化,黃曲霉毒素M,交聯(lián)在層析介質(zhì)中的抗體上。此抗體對(duì)黃曲霉毒素M,具有專一性,當(dāng)樣品通過(guò)親
      和柱時(shí),抗體選擇性的與所有存在的黃曲霉毒素M (抗原)鍵合。用甲醇一水(10+90)將免疫親和柱上
      雜質(zhì)除去,以甲醇一水(80+20)通過(guò)免疫親和柱洗脫,加人澳溶液衍生后的洗脫液于熒光光度計(jì)中測(cè)定
      黃曲霉毒素M,含量。
      23 試劑
      除非 另有 規(guī)定,僅使用分析純?cè)噭⒅卣麴s水。
      2.3. 1 甲醇(CH,OH):色譜純。
      2.3.2 抓化鈉(NaCI),
      2. 3. 3 甲醇一水(10+90):取10 mL甲醇加人90 ml_水
      2.3 .4 .甲醇一水(80+20):取80m L甲醇加人20m L水。
      2.3.5 澳溶液儲(chǔ)備液(0.01%):稱取適量澳,溶于水后,配成。01%的儲(chǔ)備液,避光保存。
      2.3.6 嗅溶液工作液(0.00200):取10m L0 .01 %的嗅溶液加人40m l水混勻,于棕色瓶中保存?zhèn)溆?/span>
      現(xiàn)用現(xiàn)配。
      2.3.7 二水硫酸奎寧(C,oH z,N zO z·H2S 04·2H20).
      2.3. 8 硫酸溶液(0.05 m ol/L):取2.8m l濃硫酸,緩慢加人適量水中,冷卻后定容至10 00m l。
      2.3. 9 熒光光度計(jì)校準(zhǔn)溶液:稱取0.34 0g 硫酸奎寧(C2oH 24N 20 2·H2S認(rèn)·2H20),用0.05m ol/L
      硫酸溶液溶解并定容至100m L,此溶液熒光光度計(jì)讀數(shù)相當(dāng)于2.0 p g/L黃曲霉毒素M,標(biāo)準(zhǔn)溶液。
      0.05 m ol/I硫酸溶液熒光光度計(jì)讀數(shù)相當(dāng)于0.0 F ag/l黃曲霉毒素M-
      2.4 儀器
      2.4. 1 熒光光度計(jì)
      2.4. 2 離心機(jī):離心力不低于40 00r /min
      GB/T 18980-2003
      2.4.3 玻璃纖維濾紙:直徑11 cm,孔徑1.5 pme
      2.4.4 黃曲霉毒素M,免疫親和柱。
      2.4.5 空氣壓力泵。
      2.4.6 玻璃試管:直徑12 mm.長(zhǎng)75 mm,無(wú)熒光特性。
      2.4. 7 玻璃注射器。
      2.5 分析步甄
      2.5. 1 樣品提取
      2.5.1.1 乳
      取 50 m L乳樣品,加人1.0 g 抓化鈉,40 00r /min離心力下離心10m in,小心移取用于分析的乳底
      層脫脂部分,不要擾動(dòng)頂部脂肪層,將脫脂的乳以玻璃纖維濾紙過(guò)濾,濾液備用。
      2.5.1.2 乳粉
      稱取 5.0 g 乳粉,用30`C^ -60℃水將其慢慢溶解,定容為50m L,加人1.0 g 抓化鈉,以下按
      2.5.1.1的步驟操作。
      2.5.2 凈化
      將免 疫 親 和柱連接于10m L玻璃注射器下。準(zhǔn)確移取10.0 m L上述濾液注人玻璃注射器中,將空
      氣壓力泵與注射器連接,調(diào)節(jié)壓力使溶液以約6 mL/min流速緩慢通過(guò)免疫親和柱,直至2 mL-3 mL
      空氣通過(guò)柱體。以10 mL甲醉一水(10+90)清洗柱子兩次,棄去全部流出液,并使2 mL-3 mL空氣通
      過(guò)柱體。準(zhǔn)確加人1.0 rnL(V,)甲醇一水(80十20)洗脫液洗脫,流速為1 mL/min-2 mL/min,收集全部
      甲醉一水洗脫液于玻璃試管中,備用。
      2.5.3 測(cè)定
      2.5.3. 1 熒光光度計(jì)校準(zhǔn)
      在激 發(fā) 波 長(zhǎng)360n m.發(fā)射波長(zhǎng)450n m條件下,以。.05m ol/1硫酸溶液為空白,調(diào)節(jié)熒光光度計(jì)的
      讀數(shù)值為0.0 la g/L;以熒光光度計(jì)校準(zhǔn)溶液調(diào)節(jié)熒光光度計(jì)的讀數(shù)值為2.0 la g/L,
      2.5.3.2 樣液測(cè)定
      取上 述 洗 脫液加人1.0m L(V)0.002%澳溶液,1m in后立即于熒光光度計(jì)測(cè)定樣液中黃曲稱毒素
      M,含量c,
      2.5.3.3 空白試驗(yàn)
      用 水 代 替試樣,按2.5 .1^-2.5 .3 步驟做空白試驗(yàn)。
      2.6 結(jié).計(jì)算
      2.6. 1 乳
      乳檢 測(cè) 結(jié) 果按式(4)計(jì)算:
      X,= (c,一Co) XV,X10
      V · ·. ······。,·····..·····.··??(4)
      式中:
      X,-一試樣中黃曲霉毒素M,含量,單位為微克每升(pH/L);
      cl-— 熒光光度計(jì)中讀取的樣液中黃曲霉毒素M:的濃度,單位為微克每升(K4/L);
      ca-- 熒光光度計(jì)中讀取的空白試驗(yàn)中黃曲霉毒素M:的濃度,單位為微克每升(KB/L);
      V,-— zui終凈化甲醇一水洗脫液體積,單位為毫升(mL) ;
      V--一通過(guò)親和柱試樣體積,單位為毫升(mL) ;
      10一一儀器的讀數(shù)系數(shù)。
      計(jì)算結(jié)果表示到小數(shù)點(diǎn)后一位。
      GB/T 18980-2003
      2.6.2 乳粉
      乳粉 檢 測(cè) 結(jié)果按式(5)計(jì)算:
      X,二
      (c2一CO X V, X 10
      仇義V ··················。·········? ?(5)
      式中:
      Xz— 試樣中黃曲橄毒素M、含量,單位為微克每千克(Fig/kg);
      ci- 熒光光度計(jì)中讀取的樣液中黃曲霉毒素M、的濃度,單位為微克每升如g/L;
      ca- 熒光光度計(jì)中讀取的空白試驗(yàn)中黃曲霉毒素M,的濃度,單位為微克每升伽g/L);
      叭— zui終凈化甲醉一水洗脫液體積,單位為毫升(mL;
      V— 通過(guò)親和柱試樣體積,單位為毫升(mL) ;
      m- 50 mL試樣中所含乳粉的質(zhì)量數(shù),單位為克每毫升(g/mL) ;
      10— 儀器的讀數(shù)系數(shù)。
      計(jì)算結(jié)果表示到小數(shù)點(diǎn)后一位。
      GB/T 18980--2003
      附 錄 A
      (資 料 性 附 錄 )
      多個(gè)不同實(shí)驗(yàn)室的試驗(yàn)結(jié)果
      世 界各 地 16個(gè)實(shí)驗(yàn)室參加了低脂肪(I%)和高脂肪(28 )乳粉樣品的協(xié)同試驗(yàn)。高脂肪樣品是用
      于制作參比物質(zhì)的剩留物[4口,所以黃曲霉毒素M,的含量是已知的。
      對(duì)于 乳 粉 ,其污染水平為。08p g/kg--0.6 p g/kg,即對(duì)于乳而言,污染水平為8n g/L-60n g/I.
      試驗(yàn) 結(jié) 果 根據(jù)ISO 5725-1和ISO 5725-2仁2;3〕規(guī)定的統(tǒng)計(jì)方法獲得,其精密度的數(shù)據(jù)列于表A.1
      (注:試驗(yàn)數(shù)據(jù)來(lái)自于參考文獻(xiàn)「5〕和「6]).
      表 A .1 箱 密 度 數(shù) 據(jù)
      樣品編號(hào)1 2 3 4 5
      實(shí)驗(yàn)室個(gè)數(shù)12 4 l3 11 14
      平均值/(ng/kg) 81 150 80 202 580
      重復(fù)性值。/(ng/kg) 23 60. 1 15 27 203
      再現(xiàn)性值R/(ng/kg) 52 98 41 61 310
      重復(fù)性變異系數(shù)/(%) 9. 9 14.0 6. 8 4. 7 12. 5
      復(fù)驗(yàn)性變異系數(shù)/(寫) 23 22. 7 18. 3 10.8 19. 1

      減少的實(shí)驗(yàn)室數(shù)是根據(jù)Cochran和Grubbs統(tǒng)計(jì)方法應(yīng)該從樣本中剔除的數(shù)據(jù)

       

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